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全自動(dòng)蛋白印跡儀的操作步驟

發(fā)布日期: 2023-12-23
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蛋白印跡儀就是用于免疫印跡試驗(yàn)的儀器。蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗(yàn))即Western Blot。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。
 
使用全自動(dòng)蛋白印跡儀的操作步驟如下:
1.準(zhǔn)備樣品:將需要檢測的蛋白樣品進(jìn)行電泳分離,并將其轉(zhuǎn)移到聚丙烯酰胺凝膠膜上。
2.準(zhǔn)備試劑:制備蛋白印跡檢測試劑盒,并按照說明書添加相應(yīng)試劑。
3.貼膜:將聚丙烯酰胺凝膠膜轉(zhuǎn)移到印跡膜上,定位并貼緊膜。
4.洗滌:將印跡膜以及膜上的樣品進(jìn)行洗滌處理,以去除潛在的非特異性結(jié)合。
5.初級(jí)抗體結(jié)合:將準(zhǔn)備好的初級(jí)抗體添加到印跡膜上,進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)。
6.次級(jí)抗體結(jié)合:將準(zhǔn)備好的標(biāo)記有酶的次級(jí)抗體添加到印跡膜上,進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)。
7.顯色:將印跡膜與顯色劑反應(yīng),產(chǎn)生特異性顏色。
8.停止反應(yīng):將反應(yīng)停止劑加入印跡膜上,停止反應(yīng)。
9.圖像獲?。簩⒂≯E膜放置在全自動(dòng)蛋白印跡儀中,啟動(dòng)設(shè)備進(jìn)行圖像獲取。
10.數(shù)據(jù)分析:對(duì)圖像數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,得出需要的數(shù)據(jù)結(jié)果
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